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    2. 安捷倫Seahorse XF細胞線粒體壓力測試實驗結果解析

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      Seahorse XF細胞線粒體壓力測試實驗使用XF傳感器探針板內置的加藥孔,在實驗過程中實時將呼吸作用的調節劑加入細胞孔中,從而得到反映線粒體功能的關鍵參數,包括:線粒體基礎呼吸、ATP產生關聯呼吸、最大呼吸、備用呼吸能力以及非線粒體呼吸等。

      實驗簡介:

      實驗使用的調節劑為寡霉素 (Oligomycin)、羰基氰-4 (三氟甲氧基)苯腙(Carbonyl cyanide-4(trifluoromethoxy) Phenylhydrazone, FCCP)、魚藤酮 (Rotenone)和抗霉素A (Antimycin A)。

      OligomycinATP合酶(復合物V)抑制劑,它影響或減少通過ETC的電子流,導致線粒體呼吸或OCR減少。減少的OCR與細胞ATP的產生相關。

      FCCP是解偶聯劑,它可以破壞質子梯度和線粒體膜電位,加入后通過ETC的電子流不受限制使復合物IV耗氧量達到最大。FCCP激發的OCR可用來計算備用呼吸能力。備用呼吸能力是衡量細胞對增加的能量需求或壓力的反應能力。

      Rotenone是復合物I的抑制劑,Antimycin A是復合物III的抑制劑,它們聯合關閉了線粒體呼吸,從而能夠計算由線粒體外的過程驅動的非線粒體呼吸耗氧。

      實驗結果意義:

      基礎呼吸(Basal respiration)用來滿足細胞ATP需求和線粒體質子滲漏的氧消耗,表示細胞在基礎條件下的能量需求。

      ATP產生(ATP Production)加入ATP合酶抑制劑寡霉素后減少的氧氣消耗速率,代表基礎呼吸中被用來驅動ATP產生的部分,表示用來滿足細胞能量需求的線粒體ATP產生。

      H+(質子)滲漏(H+ (Proton) leak)ATP產生不偶聯的基礎呼吸的剩余部分,質子滲漏可以被看作是線粒體損傷的標志,也可被看作是一種調節線粒ATP產生的機制。

      最大呼吸(Maximal respiration)加入解偶聯劑FCCP之后獲得的最大氧氣消耗速率。FCCP通過刺激呼吸鏈以最大能力運轉模擬生理的能量需求,導致底物(糖、脂肪和氨基酸)的快速氧化以應對這一代謝挑戰,顯示細胞能夠達到的最大呼吸速率。

      備用呼吸能力(Spare respiratory capacity)這個測量指標表示細胞應對能量需求的能力以及細胞呼吸與其理論最大值的差距,細胞應對能量需求的能力可作為細胞適應性或靈活性的一個指標。

      非線粒體呼吸(Nonmitochondrial respiration)加入魚藤酮和抗霉素A后,由于一部分細胞中的酶繼續消耗氧而存留的氧消耗,這對于線粒體呼吸的準確測量很重要。

      實驗結果計算公式:

      Seahorse XF細胞線粒體壓力測試是測量細胞線粒體功能的金標準,提供了完整的線粒體代謝功能狀態,揭示用基礎代謝測定無法提供的關鍵信息及數據。

      聲明:僅供研究使用,不用于診斷性操作。

      版權說明:版權歸原作者及安捷倫細胞團隊,本文內容部分來源于美國安捷倫科技公司官網(www.agilent.com)。如有問題請聯系小編,歡迎批評指正,衷心感謝!

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      2022年3月15日 09:17
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